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细胞培养的基本知识——细胞培养的无菌环境
点击次数:44 发布时间:2021-11-25

细胞培养是一种无菌技术,要求工作环境和条件必须保证无微生物和不受其他有害因素的影响。为防止微生物污染和有害因素的影响,细胞培养室要求环境清洁,空气清新、干燥、无尘。

细胞培养实验室由无菌操作区、孵育区、制备区、储藏区、清洗和消毒灭菌区6部分组成,这些区域的共同特点是房间要宽敞、明亮,地面要便于清洁、防滑,墙壁的质地光滑坚硬,仪器设备布局合理,方便操作,避免交叉干扰,陈设简洁,便于清扫。

一、无菌室

无菌室的结构:一般由更衣间、缓冲间、操作间三部分组成。

无菌室的消毒和防污染:为保持无菌状态,经常消毒是必要的,通常采用每日(使用前)紫外照射(1-2小时),每周甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸(2小时)和每月新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒。实际工作中,要根据无菌室建筑材料的差异来选择合适的消毒方法。

此外,还应注意防止无菌室的污染。造成无菌室污染的可能包括:送入无菌室的风没有被过滤除菌;进出无菌室时,能使外界空气直接对流进无菌室的操作间;等。

二、超净工作台

工作原理:鼓风机驱动空气通过高效过滤器得以净化,净化的空气被徐徐吹过台面空间而将其中的尘埃、细菌甚至病毒颗粒带走,使工作区构成无菌环境。根据气流在超净工作台的流动方向不同,可将超净工作台分为侧流式、直流式和外流式三种类型。

超净台的使用与保养:超净台的平均风速保持在0.32-0.48米/秒为宜,过大、过小均不利于保持净化度;使用前最好开启超净台内紫外灯照射10-30分钟,然后让超净台预工作10-15分钟,以除去臭氧和使用工作台面空间呈净化状态;使用完毕后,要用70%酒精将台面和台内四周擦拭干净,以保证超净台无菌。还要定期用福尔马林熏蒸超净台。

德国MB生产的Mycoplasma-offTM喷雾剂,或湿巾擦拭 5-10分钟清除,对支原体、细菌、真菌、霉菌、孢子祛除确切有效。无残留, 无腐蚀, 无致癌性,操作简单方便。


qPCR法介绍:

荧光定量PCR法(qPCR):是在常规PCR基础上,将『针对支原体特异性保守序列的探针』做荧光标记,使PCR扩增后的产物带有荧光,利用荧光信号的变化和配套软件,进行DNA扩增反应的实时监测,简称qPCR。

优点:①灵敏度高、特异性强。

②时间短,2-3小时出结果。

③检测结果可定量。

④操作简便。

缺点:①对于已做支原体灭活处理的样品,由于支原体DNA仍旧存在其中,PCR结果会出现假阳性。(可用培养法做补充验证)

②不同厂家生产的试剂盒质量差异巨大(由于引物及内在设计不同),需谨慎选择,尽量在专业人员推荐指导下使用。


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